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EZsep™ C18固相萃取柱用于水产品中氯霉素的检测

更新时间:2024-06-25       点击次数:377

前言:

        氯霉素类抗生素可作用于细菌核糖核蛋白体的50S亚基,而阻挠蛋白质的合成,属抑菌性广谱抗生素,能够用于人体某些疾病的治疗,以及作为兽药用于防范及治疗动物疾病。在日常生活中氯霉素等激素类药物会广泛应用于养殖业,例如鱼、虾等水产类食品,养殖户为了所养殖的鱼、虾能够快速生长,并且不生病,会放很多抗生素类药物到养殖的水中,从而造成药物在动物体内及动物体表富集,而人类食用这些肉类会使兽药残留进入人体,从而影响身体健康。

本文参照《GB 31658.2-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》,利用EZsepTMC18固相萃取柱(1000 mg/6mL货号:PZ10304进行净化,再用高效液相色谱串联质谱检测进行检测,建立了一种对水产品中氯霉素的分析方法。

 

关键词:

水产品,氯霉素,固相萃取,

1,  实验过程

1.1     仪器与试剂   

SPE1000 全自动固相萃取系统北京莱伯泰科仪器股份有限公司

M64高通量平行浓缩仪北京莱伯泰科仪器股份有限公司

4500质谱系统,SCIEX公司

EZsepTMC18固相萃取柱(1000 mg/6mL货号:PZ10304北京莱伯帕兹检测科技有限公司

冷冻离心机,GL-20G-,上海安亭科学仪器厂  ;  

甲醇(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;

乙腈(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;

正己烷(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;

乙酸乙酯(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;

氯化钠(分析纯),购自国药集团化学试剂有限公司

1.2                      工作液配制

氯霉素标准储备液:100μg/mL,溶剂为甲醇,购自坛墨质检标准物质中心 。

氯霉素-D5标准储备液:100μg/mL,溶剂为甲醇,购自坛墨质检标准物质中心 。

标准中间液:移取氯霉素储备液和氯霉素-D5标准储备液各0.1mL,分别用甲醇稀释至10mL容量瓶中,配制成浓度为1.0μg/mL的氯霉素标准中间液氯霉素-D5同位素标准中间液。

标准使用液:移取氯霉素中间液和氯霉素-D5标准中间液各1mL,分别用甲醇稀释至10mL容量瓶中,配制成浓度为0.1μg/mL的氯霉素标准使用液及氯霉素-D5同位素标准使用液。

分别移取0.1μg/mL的氯霉素标准使用液0、0.01、0.05、0.10、0.20、0.50mL分别置于10mL容量瓶中并加入氯霉素-D5同位素标准使用液0.2 mL以纯水定容至刻度,标准浓度为0 μg/L、0.1 μg/L、0.5 μg/L、1 μg/L、2μg/L、5μg/L, 氯霉素-D5浓度固定为2μg/L。

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

 取鱼肉5g,加氯霉素-D5同位素标准使用液0.2 mL、乙腈5mL、4%氯化钠溶液5mL,涡旋振荡2min,4000r/min离心10min,取上清液,残渣重复提取1次,合并上清液。加正己烷5mL,涡旋振荡1min,2000r/min离心10min,弃去上层液,正己重复处理1次。加水饱和的乙酸乙酯溶液5mL,涡旋振荡1min,2000r/min离心10min,上层液转移到20mL上样瓶中,重复提取1次,合并提取液,氮气吹干,加3mL5%乙腈水溶液溶解,混匀,备用待净化。

1.3.2 固相萃取净化 

EZsepTMC18固相萃取柱(1000 mg/6mL货号:PZ1030410mL甲醇、10mL水依次进行活化,取1.3.1待净化液上样,上样结束后用3mL、3mL水淋洗萃取柱,再用4mL 50%甲醇水溶液洗脱萃取柱,收集洗脱液,加水饱和乙酸乙酯4mL,涡旋振荡1min,2000r/min离心5min,取上层液,重复处理1次,合并上层溶液,氮气吹至近干干。加1mL 50%甲醇水溶液溶解,混匀过微孔滤膜后供LC-MS/MS测定。

1.3.3 LC-MS/MS仪器条件

色谱柱:Shim-pack Velox C18(2.7μm,2.1*100mm);

检测方式:多反应监测(MRM);

流动相:A:水-B: 甲醇(50:50);

流速:0.2mL/min;

进样量:1μL;

2,                      实验结果

EZsep™ C18固相萃取柱用于水产品中氯霉素的检测 

图1 标液色谱图

EZsep™ C18固相萃取柱用于水产品中氯霉素的检测 

图2氯霉素标准曲线图

3,                      结论 

本次实验展示了使用EZsepTMC18固相萃取柱(1000 mg/6mL货号:PZ10304对水产品中氯霉素进行净化,通过高效液相色谱串联质谱进行测定,其加标回收率在84.7%~105.2%之间,RSD在8.1%,能够满足标准要求。说明EZsepTMC18固相萃取柱(1000 mg/6mL货号:PZ10304能很好的完成方法中的净化工作,并且结果稳定、可靠。

4,                      参考文献

1.       《GB 31658.2-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》

 

 

 

 1   加标回收率结果

加标浓度μg/kg

回收率(%

均值

RSD

1

2

3

4

5

6

%

%


1.0

86.3

84.7

101.3

100.9

93.5

105.2

95.3

8.1