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EZsep™ AFB&G免疫亲和柱用于玉米中黄曲霉毒素B族的检测

更新时间:2024-06-25       点击次数:360

前言:

黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,简写为AFB1)是已知的化学物质中致癌性非常强的一种,对人和动物具有强烈的毒性,其毒性作用主要是对肝脏的损害。

黄曲霉毒素B1存在于土壤,动植物各种坚果,特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。一般以热带和亚热带等南方高温、高湿地区受污染最为严重,食品中黄曲霉毒素的检出率比较高。黄曲霉毒素耐热,280℃才可裂解,故一般烹调加工温度下难以被破坏。国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。

本文参考《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定 第三法为高效液相色谱-柱后衍生法》,利用EZsepTM AFB&G免疫亲和柱(3mL,20/pk,货号:PZ24102)净化样品,再通过高效液相色谱仪进行检测,建立了一种玉米中黄曲霉毒素B族的分析方法。

 

关键词:

黄曲霉毒素B族免疫亲和,高效液相色谱

 

1 实验过程

1.1 仪器与试剂

SPE1000全自动固相萃取系统,北京莱伯泰科仪器股份有限公司;

LC600二元高压梯度高效液相色谱(北京莱伯泰科仪器股份有限公司)配光化学衍生器;

E.T.氮吹浓缩仪(货号:C020017),北京莱伯帕兹检测科技有限公司

冷冻离心机,GL-20G-Ⅱ,上海安亭科学仪器厂;

EZsepTM AFB&G免疫亲和柱(3mL,20/pk,货号:PZ24102),北京莱伯帕兹检测科技有限公司

甲醇(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;

乙腈(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;

超纯水;

0.1%吐温-水:1mL的吐温-20,加水定容至1L

1.2 工作液配制

乙腈中4种黄曲霉毒素混标储备液:1.0μg/mL,坛墨质检 。

黄曲霉毒素混标中间液:移取黄曲霉毒素混标储备液1mL,用甲醇稀释至10mL容量瓶中,配制成浓度为100ng/mL的中间液。

黄曲霉毒素混标工作液:移取黄曲霉毒素混标中间液1mL,用甲醇稀释至10mL容量瓶中,配制成浓度为10ng/mL的工作液。

分别移取100ng/mL黄曲霉毒素混标中间液10μL、50μL、200μL、500μL、1 000μL至10 mL容量瓶中,用初始流动相定容至刻度,得到浓度依次为0.1 ng/mL、0.5 ng/ml、2.0 ng/ml、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL的标准工作溶液

 

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

 称取5g玉米试样(精确至0.01g)于50mL离心管中,加入20.0mL甲醇-水溶液(70+30),涡旋混匀,用均质器10000r/min上下震荡均质3 min,在6000r/min下离心20min。准确移取4mL上清液,加入46mL0.1%吐温-,混匀,待净化。

1.3.2 净化与浓缩

将低温保存的EZsepTM AFB&G免疫亲和柱(3mL,20/pk,北京莱伯帕兹检测科技有限公司货号:PZ24102恢复至室温,待免疫亲和柱内原有液体流尽后移取上述净化液上样,上样结束后20mL2淋洗萃取柱,之后在真空状态下干燥1min最后用2mL甲醇洗脱洗脱液40下氮吹浓缩至近干,再用流动相定容至1 mL涡旋混匀,0.22μm滤膜过滤,待检测

1.3.3 高效液相色谱检测条件

色谱柱:Promosil C185μm,4.6*250mm

波长激发波长360nm,发射波长440nm

流速1.0mL/min

40℃

进样量20μL

流动相超纯水:甲醇+乙腈(50+50)=68:32

2 实验结果

 

1 标准样品色谱

 

2 加标样品色谱

 

3空白样品色谱

3 结论 

本实验使用EZsepTM AFB&G免疫亲和柱(3mL,20/pk,北京莱伯帕兹检测科技有限公司货号:PZ24102玉米黄曲霉毒素B族进行净化后通过高效液相色谱仪进行检测,该方法的加标回收率在81.1%~93.2%之间RSD2.2%~2.7%之间。回收率和稳定性满足标准要求,说明EZsepTM AFB&G免疫亲和柱能很好的完成方法中的净化工作,并且结果稳定、可靠。

4 参考文献

[1] GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定 第三法高效液相色谱-柱后衍生法


1  加标回收率

基质

黄曲霉毒素

添加量

μg/kg)

回收率(%)

平均值(%)

RSD(%)

玉米

B1

0.1

83.2

85.1

86.3

81.1

83.9

2.7

B2

0.1

91.8

90.9

93.2

88.5

91.1

2.2