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血清中16种全氟及多氟烷基化合物的测定-超高效方案

更新时间:2024-07-24       点击次数:900

简介

本方法使用创新型分体式HMR净化管/96孔板结合96正压固相萃取装置一步式净化血清样品,再通过LC-MS/MS进行检测,回收率达90%左右。样品处理过程简单,结果准确。

 

方法优势

Ø                      蛋白沉淀和磷脂去除一步完成,可有效去除血清中蛋白、磷脂类化合物对实验结果的影响

Ø                      通过式净化,极大简化前处理步骤,约1h即可完成前处理操作

Ø                      上样量仅需50μL,大大节省了宝贵的样品

Ø                      试剂耗材使用量更少,更加环保节约

Ø                      柱效远超直通式SPE,回收率稳定,可达90%左右

 

配套设备及耗材

序号

产品名称

产品描述

1

96孔正压固相萃取装置

EZ PRE-96正压固相萃取装置

2

96孔氮吹仪

EZ VAP-96氮吹仪

3

双位96孔氮吹仪

EZ VAP-192双位96孔氮吹仪

4

MixMate® 混匀小精灵

MixMate®主机,不含样品管管架,230 V/50-60 HzCN

5

8道移液器

8-通道,10-100µL, 可调量程

6

超效分体96孔集成板HMR

HMR S-micro BIO 96 Well, 15mg, 1 mL, 1/PK

7

超效分体96SPEHMR

HMR S-micro BIO SPE, 15mg, 1 mL, 100/PK

8

超效96孔板微径小柱适配器

Micro columnadapter rackSUS,1/PK

9

20全氟混标(包含方法中15种全氟)

PFAS Mixture with 20 analytes, 5 µg/mL in Methanol/Water1mL

10

11--3-氧杂全氟十一烷磺酸钾

50 µg/mL1mL,甲醇/水,CAS83329-89-9

11

13种全氟内标

Mass-Labelled PFC Extraction Standards Solution 2.0μg/mL 1.2mL

12

血清中全氟质控品Y2403

INSPQ PFC Reference Material Y24031/kit

13

血清中全氟质控品Y2301

INSPQ PFC Reference Material Y23011/kit

14

血清中全氟质控品Y2304

INSPQ PFC Reference Material Y23041/kit

15

Leosil C18/PFP核壳柱(GB23200.121方法专用)

Leosil Shell C18/PFP, 2.7µm, 100* 2.1mm, 1/PK

16

96孔收集板

Collection Plate, 1 mL/Round/U-Shaped, 96 Well, 10/PK

17

封板膜

660 Tape Sealing Pad for 96 Well Plate25 Sheets/Pad10Pad/pk

 

样品前处理

血清中16种全氟及多氟烷基化合物的测定-超高效方案 

 

仪器条件

1)色谱条件

色谱柱:Leosil C18/PFP核壳柱 (2.7µm, 100* 2.1mm

流动相:5mmol/L乙酸甲醇(A),5mmol/L乙酸水溶液(B

流速:0.4mL/min

柱温:50℃

进样量:2μL

 

流动相梯度表

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2)质谱条件

AB 6500+质谱检测器采用多反应检测模式(Multiple

Reaction MonitoringMRM),ESI负离子模式。

离子源:电喷雾离子源;

扫描方式:负离子扫描;

检测方式:多反应离子监测(MRM);

电喷雾电压:-4500V

离子源温度:400℃

辅助气160psi

辅助气260psi

气帘气:30psi

碰撞气体:Medium

 

目标PFASs的离子对、锥孔电压、碰撞能量等参数见下表

血清中16种全氟及多氟烷基化合物的测定-超高效方案 

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方法定量限

在以下两种方法中取最大值作为本项目的方法定量限(Limit of quantificationLOQ):(1)在实际血清基质中满足信噪比大于10的最低浓度,信噪比采用RMSRoot Mean SquareRMS)方法;(2)标准曲线工作范围内满足实测浓度在理论值偏差±20%之内的最低浓度。由于本研究中样品未经浓缩和稀释,无稀释倍数,因此方法定量限即为LOQ,如下表。

 

16PFASs的定量限

血清中16种全氟及多氟烷基化合物的测定-超高效方案 

 

回收率和精密度

血清中16种全氟化合物不同水平加标回收率和精密度(n=6

血清中16种全氟及多氟烷基化合物的测定-超高效方案 

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实验注意事项

1、内标体积太小(5020微升),稍微有损失,就会影响定量,所以建议先加样品、再加内标,最后加乙腈;

2、加液体过程中,一定注意尽量让移液枪的枪头接近净化管中最上层筛板加液。需要正确使用移液枪,特别是小体积加样时;

3、建议分两次加入乙腈。如果只加一次乙腈,可能洗脱不完全,净化管里有残留。压完一次,加入乙腈,再正压;

4、乙腈:血清的比例从31开始优化;

5、其他项目根据化合物的性质选择甲醇或乙腈作为提取溶剂。