耗材专区 | 应用EZsep™HLB固相萃取柱建立化妆品中丙酸氯倍他索的检测方法

前言

丙酸氯倍他索是一种抗炎皮质类固醇，属于糖皮质激素中的一种，具有较强的抗炎、抗瘙痒和毛细管收缩作用，因此很多三无化妆品可能会违规添加糖皮质激素，使用初期由于强大的抗炎功能，使皮肤呈现出一种光滑洁白吹弹可破的状态，但长时间使用，就开始出现红血丝、爆痘，皮肤敏感等问题，继续使用会使皮肤情况越来越糟糕，停用皮肤情况更糟糕，最终只能求医慢慢来调整。

本文参照《GB/T 24800.2-2009 化妆品中四十一种糖皮质激素的测定》，利用EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，货号：PZ12602）对化妆品样品进行净化，再通过高效液相色谱串联质谱仪进行检测，建立了化妆品中丙酸氯倍他索的检测方法，此方法的回收率及平行性良好，适合化妆品中丙酸氯倍他索的检测。

1、实验过程

1.1 仪器与试剂  

SPE1000 全自动固相萃取系统，北京莱伯泰科仪器股份有限公司；

4500质谱系统，SCIEX公司；

E.T.氮吹浓缩仪，货号：C020017，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，货号：PZ12602），北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

离心机，H1850，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；

乙腈（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

甲醇（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司。

1.2 工作液配制

丙酸氯倍他索标准储备液：100ug/mL，溶剂为甲醇，购自坛墨质检标准物质中心；

丙酸氯倍他索标准工作液：取100μL的标准储备液于10mL的容量瓶中，用40%乙腈水溶液定容，得到浓度为1.0μg/mL的标样工作液；

移取1.0μg/mL的苯并（a）芘标准工作液0.05、0.1、0.2、0.4、0.8mL，分别置于1mL容量瓶中，用40%乙腈水溶液定容至刻度，得到浓度为0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0μg/mL的标准曲线。

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

准确称取化妆品样品0.2g（精确至0.01g）于15mL塑料离心管中，加入3mL饱和氯化钠溶液，涡旋混匀使样品分散，准确加入2mL乙腈，充分涡旋提取2min，5000r/min离心10min，吸出上层清液于50mL离心管中，下层氯化钠溶液用2mL乙腈重复提取1次，合并2次乙腈提取液，在提取液中准确加入40mL高纯水，混匀，加入亚铁氰化钾溶液0.2mL，混匀，加入乙酸锌溶液0.2mL，混匀，5000r/min离心10min，转移出上清液待净化。

1.3.2 固相萃取净化

EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，货号：PZ12602）依次用5mL甲醇、10mL水活化，取1.3.1待净化液上样，上样结束后用6mL10%乙腈水溶液淋洗萃取柱，再用4mL甲醇洗脱萃取柱，收集全部洗脱液，然后于E.T.氮吹浓缩仪（货号：C020017）40℃下氮气吹干，准确吸取4mL水涡旋复溶0.5min，过微孔滤膜后供LC-MS/MS测定。

1.3.3 LC-MS/MS仪器条件

色谱柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；

检测方式：多反应监测（MRM）；

流动相：A:0.1%乙酸水，B:0.1%乙酸乙腈（梯度洗脱程序见表1）；

流速：0.3mL/min；

进样量：1μL。

表1 梯度洗脱程序

2、实验结果

2.1 加标回收率结果

表2 加标回收率结果

2.2 加液色谱图

图1 标液色谱图

2.3 加标样品色谱图

图2 加标样品色谱图

3、结论

本次实验展示了使用EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，货号：PZ12602）对化妆品中丙酸氯倍他索进行净化，通过高效液相色谱串联质谱仪进行测定，该方法的加标回收率在77.8%~83.3%之间，RSD为2.6%，能够满足标准要求。说明EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，货号：PZ12602）能很好的完成方法中的净化工作，并且结果稳定、可靠。

4、参考文献

《GB/T 24800.2-2009 化妆品中四十一种糖皮质激素的测定》