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耗材专区血液中咖啡因的测定

2022-11-11 [779]

1、前言

咖啡因是一种黄嘌呤生物碱化合物,是一种中枢神经兴奋剂,能够暂时的驱走睡意并恢复精力,临床上用于治疗神经衰弱和昏迷复苏。有咖啡因成分的咖啡、茶、软饮料及能量饮料十分畅销,因此,咖啡因也是普遍被使用的精神药品。适度地使用咖啡因具有舒张血管、促进血液循环、预防高血压、心肌梗塞、利尿、解毒、抗氧化、抗衰老、减肥等药理和生理作用,但是,大剂量或长期使用也会对人体造成损害,能够导致“咖啡因中毒”,如神经过敏,易怒,焦虑,震颤,肌肉抽搐(反射亢进),失眠和心悸。中国把咖啡因列为“精神药品”管制,属于一种毒品。目前有关咖啡因检测分析的研究报道不多,为此本文通过使用SPE 1000全自动固相萃取系统对人体血液中咖啡因进行回收率测定分析,探索血液咖啡因样本检测的方法。

 

 

2、实验过程2.1仪器与试剂

 

SPE 1000全自动固相萃取系统,莱伯泰科

 

MV5多通道平行浓缩系统,莱伯泰科

 

LC600 二元高压梯度高效液相色谱,莱伯泰科

 

EZsepTMHLB固相萃取柱,(60mg/3mL北京莱伯帕兹检测科技有限公司 货号:PZ12602

血液替代品:牛血清,市售

 

2.2工作液配制

 

咖啡因标准储备液:100μg/mL

 

咖啡因标准工作液:取1mL标准储备液放入10mL容量瓶中,用甲醇定容配置成10μg/mL标准工作液 

 

2.3实验部分

 

2.3.1样品制备

 

取血液样本1mL加入磷酸盐缓冲液1mL平衡,加入50μL标准工作液,混合均匀,加标浓度为500ng/mL,待固相萃取。

 

2.3.2净化与浓缩

 

EZsepTMHLB固相萃取柱,(60mg/3mL北京莱伯帕兹检测科技有限公司 货号:PZ12702)用5mL甲醇乙酸乙酯(11)、5mL水和5mL磷酸盐缓冲液进行活化,取全部样液上样,上样结束后用2mL磷酸盐缓冲液和2mL水淋洗萃取柱,在真空状态下干燥0.5min,最后用5mL 磷酸盐缓冲液近干后,用流动相定容至1mL 。涡旋混匀,0.22μm滤膜过滤,待检测。

 

2.3.3 高效液相色谱检测条件

 

色谱柱:Promosil C185μm4.6*150mm

 

波长:272nm

 

流速:1mL/min

 

柱温:40℃

 

进样量:20μL

 

流动相:甲醇-= 2476

 

 

3、实验结果

 

图1标准样品色谱图

 

图2加标样品色谱图

 

图3空白样品色谱图表1 加标回收率结果

 

 

4、结论

本次实验展示了一种使用EZsepTMHLB固相萃取柱,(60mg/3mL北京莱伯帕兹检测科技有限公司 货号:PZ12702)对血液中咖啡因进行萃取净化,其加标回收率95.8%~99.2%,重复性RSD1.6%。说明EZsepTMHLB固相萃取柱适用于血液中咖啡因的检测,并且在回收率和平行性上表现优异。

 

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