EmporeTM膜式固相萃取柱萃取尿液中四氢大麻酚代谢物并以GC-MS定量

1， 实验过程

1.1 仪器与试剂 

所有试剂均为分析纯或更高。

THCCOOH（100.0±0.6 μg/mL）和 MSTFA + 1% TMCS硅烷化试剂，均购自西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司；

人工尿液（PH：5.7-500mL），购自福州飞净生物科技有限公司；

乙酸乙酯（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

甲醇（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

正己烷（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

Empore^TM 膜式固相萃取柱：4215SD-C18，购自美国CDS公司；

气质联用仪：7890B-5977B安捷伦气质联用仪，Agilent公司。 

1.2 工作液配制 

THCCOOH标准使用溶液：0.1 μg/mL，溶剂体系为甲醇；

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

取12个15mL离心管，分别装入3mL尿液样品，再加入不同体积的THCCOOH标准使用液（加标量分别为3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng），每个标点进行平行两次制备。然后加入300μL氢氧化钾溶液（10mol/L）,在60℃水浴环境下水解15min取出后冷却至室温，再以冰醋酸调节pH值到4.0~4.5。

Empore^TM固相萃取柱（C18, 7mm/3mL）预先用150μL甲醇进行活化，之后进行上样（在重力作用下使样品自然流下），上样结束后用750μL甲醇-水溶液（50：50）淋洗萃取柱，在690mmHg真空状态下干燥5min，最后用800μL正己烷-乙酸乙酯溶液（75：25）进行洗脱。

1.3.2 净化与浓缩

洗脱液经40℃氮吹至干，然后加入100μL衍生试剂（MSTFA+1%TMCS），在60℃水浴条件下衍生20min，转移至样品瓶待 GC-MS分析。

1.3.3 标准曲线配制

取6个20mL样品瓶，分别加入不同体积THCCOOH标准使用溶液，加入THCCOOH的质量分别为3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng，参照与加标样品制备同等浓缩、衍生条件进行前处理，待GC-MS分析。

1.3.4 GC-MS分析

进样口温度：290℃；进样模式：不分流进样；流速：1.0mL/min；

柱温：100℃保持1min，然后以30℃/min的速度升至300℃，保持5min。

表1 THCCOOH定量、定性离子

2, 实验结果（外标法） 

实验发现：标准曲线第一个点（3ng）信噪比较低，难以准确积分。标准曲线第五个点（150ng）结果明显偏低，为实验操作衍生化失误引进误差。 

 图1标准曲线校准点重叠色谱图

 

图2 标准曲线

3，结果与讨论

本次实验展示了一种使用CDS-Empore^TM 固相萃取柱（215SD-C18），对尿液中四氢大麻酚代谢物（THCCOOH）进行富集提取的简单有效方法。实验中，尿液加标样品经水解、固相萃取净化、浓缩以及衍生等前处理步骤后，经GC-MS分析得到不同浓度下四氢大麻酚代谢物（THCCOOH）的加标回收率，回收率范围在78.7-110.1%，结果较好。标准曲线浓度范围在0.15μg/mL~3.0μg/mL时，相关系数R²=0.9998，具有较好线性。实验表明，CDS-Empore^TM 固相萃取柱（215SD-C18）适用于尿液中四氢大麻酚代谢物（THCCOOH）的萃取净化。该方法具有操作简便，线性范围宽，稳定性高等优点，并在尿液量少，分析物浓度较低时显示出优异的回收率。

4，参考文献

1，Jasbir Singh and Linda Johnson，Solid-Phase Extraction of THC Metabolite from Urine using the Empore Disk Cartridge Prior to Analysis by GC-MS，Journal of Analytical Toxicology, Vol. 21, September 1997。

2，R.H. Liu and B.A. Goldberger. Handbook of Workplace Drug Testing. AACC Press, Washington, DC, 1995.

3, A.H.B. Wu, N. Liu, Y.-J. Cho, K.G. Johnson, and S.S. Wong. Extraction and simultaneous elution and derivatiztion of 11-nor-9- carboxy-△⁹-tetrahydrocannabinol using Toxi-Lab SPEC prior to GC/MS analysis of urine, J. Anal. Toxicol. 17:215-17 (1993)