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EmporeTM膜式固相萃取柱萃取尿液中四氢大麻酚代谢物并以GC-MS定量

2022-07-11 [117]
 摘要:

在(-)-11-nor-9-羧基-9-四氢大麻酚代谢物(THCCOOH)的气相色谱-质谱分析中,评估了EmporeTM固相萃取柱(4215SD-C18的样品制备。固相萃取柱性能由测定的回收率决定。回收率范围在78.7-110.1%。标准曲线线性范围在0.15μg/mL~3.0μg/mL时,相关系数R2=0.9998

 

关键词:

四氢大麻酚THCCOOH,外标法,GC-MS 

 

 

前言

美国CDS公司膜式固相萃取 (SPE)技术,以其有机溶剂消耗、结果重现性高、样品制备的通量高、提取物更清洁可减少 GC 系统的污染以及自动化提取等优势[1],广泛应用于药物检测领域[2,3]。本实验使用美国CDS公司膜式固相萃取柱(EmporeTM4215SD-C18提取尿液中△9-四氢大麻酚(THC,大麻)代谢物(-)11-nor-9-羧基-9-四氢大麻酚 (THCCOOH),并以GC-MS分析定量

1, 实验过程

1.1 仪器与试剂 

所有试剂均为分析纯或更高。

THCCOOH(100.0±0.6 μg/mL)和 MSTFA + 1% TMCS硅烷化试剂,均购自西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司

人工尿液(PH:5.7-500mL),购自福州飞净生物科技有限公司;

乙酸乙酯(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司

甲醇(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司

正己烷(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司

EmporeTM 膜式固相萃取柱:4215SD-C18,购自美国CDS公司;

气质联用仪:7890B-5977B安捷伦气质联用仪,Agilent公司。 

1.2 工作液配制 

THCCOOH标准使用溶液:0.1 μg/mL,溶剂体系为甲醇;

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

取1215mL离心,分别装入3mL尿液样品,加入不同体积的THCCOOH标准使用液(加标量分别3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng),每个标点进行平行两次制备。然后加入300μL氢氧化钾溶液(10mol/L),在60水浴环境下水解15min取出冷却至室温,再以冰醋酸调节pH到4.0~4.5。

EmporeTM固相萃取柱(C18, 7mm/3mL)预先用150μL甲醇进行活化,后进行上样(在重力作用下使样品自然流下),上样结束后用750μL甲醇-水溶液(5050)淋洗萃取柱,在690mmHg真空状态下干燥5min,最后用800μL正己烷-乙酸乙酯溶液(7525)进行洗脱。

1.3.2 净化与浓缩

洗脱液经40氮吹至干,然后加入100μL衍生试剂(MSTFA+1%TMCS),在60℃水浴条件下衍生20min,转移至样品瓶待 GC-MS分析

1.3.3 标准曲线配制

取6个20mL样品瓶,分别加入不同体积THCCOOH标准使用溶液,加入THCCOOH质量分别为3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng,参照与加标样品制备同等浓缩、衍生条件进行前处理,待GC-MS分析。

1.3.4 GC-MS分析

进样口温度:290;进样模式:不分流进样;流速:1.0mL/min;

柱温:100保持1min,然后以30/min的速度升至300,保持5min。

表1 THCCOOH定量、定性离子

化合物

定量、定性离子

保留时间(min)

THCCOOH

371/473/488

12.158

 

2, 实验结果(外标法) 

实验发现:标准曲线第一个点(3ng)信噪比较低,难以准确积分。标准曲线第五个点(150ng)结果明显偏低,为实验操作衍生化失误引进误差。 

 

 图1标准曲线校准点重叠色谱图

 

图2
 标准曲线

 

3结果与讨论

本次实验展示了一种使用CDS-EmporeTM 固相萃取柱(215SD-C18),对尿液中四氢大麻酚代谢物(THCCOOH)进行富集提取的简单有效方法。实验中,尿液加标样品经水解、固相萃取净化、浓缩以及衍生等前处理步骤后,经GC-MS分析得到不同浓度下四氢大麻酚代谢物(THCCOOH)加标回收率,回收率范围在78.7-110.1%,结果较好。标准曲线浓度范围在0.15μg/mL~3.0μg/mL时,相关系数R2=0.9998,具有较好线性。实验表明,CDS-EmporeTM 固相萃取柱(215SD-C18)适用于尿液中四氢大麻酚代谢物(THCCOOH)的萃取净化。该方法具有操作简便,线性范围宽,稳定性高等优点,并在尿液量少,分析物浓度较低时显示出优异的回收率

 

4,参考文献

1,Jasbir Singh and Linda JohnsonSolid-Phase Extraction of THC Metabolite from Urine using the Empore Disk Cartridge Prior to Analysis by GC-MSJournal of Analytical Toxicology, Vol. 21, September 1997

2,R.H. Liu and B.A. Goldberger. Handbook of Workplace Drug Testing. AACC Press, Washington, DC, 1995.

3, A.H.B. Wu, N. Liu, Y.-J. Cho, K.G. Johnson, and S.S. Wong. Extraction and simultaneous elution and derivatiztion of 11-nor-9- carboxy-9-tetrahydrocannabinol using Toxi-Lab SPEC prior to GC/MS analysis of urine, J. Anal. Toxicol. 17:215-17 (1993)

 

 

3 不同浓度加标样品重叠色谱图

 

2  加标回收率结果

序号

加标

回收率 %

均值 %

ng

1

2

1

15

82.2

96.4

89.3

2

30

101.8

109.4

105.6

3

60

89.2

78.7

83.9

4

150

93.1

101.3

97.2

5

300

91.4

110.1

100.7

注:因3ng标点信噪比偏低,在此不做数据统计

 

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