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SPE固相萃取-液相色谱串联质谱法测定动物源食品中的氯霉素

发布日期: 2021-07-12
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SPE固相萃取-液相色谱串联质谱法测定动物源食品中的氯霉素

前言

氯霉素曾广泛用于治疗各种敏感菌感染,后因对造血系统有严重不良反应,故对其临床应用现已做出严格控制。氯霉素可用于伤寒、副伤寒和立克次体病等及敏感菌所致的严重感染。氯霉素在脑脊液中浓度较高,也常用于治疗其他药物疗效较差的脑膜炎患者。由于氯霉素可引起严重的毒副作用,所以建立一种高效、快速的定量流程及检测方法尤为重要本文使用SPE1000全自动固相萃取系统对牛肉中的氯霉素进行固相萃取富集,用高效液相色谱质谱仪进行检测。

本文参考农业部781号公告-2-2006 动物源食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱—串联质谱法SPE1000全自动固相萃取系统,测定氯霉素的回收效果,实验证明氯霉素回收率在90.2%~99.5%之间,重现性RSD3.5%回收率和重现性良好,说明SPE1000全自动固相萃取系统可靠稳定,适用于动物源食品中的氯霉素样品前处理。

关键词:氯霉素SPE1000全自动固相萃取系统,液相色谱串联质谱, 

1实验过程

1.1仪器与试剂

SPE1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科公司);

SCIEX 4500 液相色谱串联质谱SCIEX);

氯霉素100 mg/L坛墨质检

氯霉素D5100 mg/L坛墨质检

氯化钠(分析纯);

正己烷(色谱纯);

乙酸乙酯(色谱纯);

乙腈(色谱纯);

C18固相萃取柱,(1000 mg/6 mL莱伯泰科)

实验用水:超纯水。

1.2标准工作液的配制

1 mL氯霉素标品于10 mL容量瓶中,甲醇定容,配置成浓度为10 μg/mL的标准储备液。

100 μL 的氯霉素标准储备液,用甲醇定容到10 mL,配制成0.1 μg/mL标准工作液

1 mL氯霉素D5标品于10 mL容量瓶中,甲醇定容,配置成浓度为10 μg/mL的标准储备液。

100 μL 的氯霉素D5标准储备液,用甲醇定容到10 mL,配制成0.1 μg/mL标准工作液

1.3试验方法

1.3.1样品准备

取均质后的样品5g置于50mL离心管中,加入内标200μL,氯霉素标液200μL,加入乙腈5mL4%氯化钠5mL,涡旋2min4000rad/min离心10min,取上清液至另一个50mL离心管中,重复提取一次,合并提取液。提取液中加入正己烷5mL,涡旋2min2000rad/min离心10min,弃去上层清液,重复一次,加入水饱和乙酸乙酯5mL,涡旋1min2000rad/min离心10min,将上层液转移到15mL离心管中,重复提取一次,合并提取液氮吹至干,用水:乙腈(95:55mL溶解,备用。

同时做样品空白,加入内标200μL,剩下同样品处理

1.3.2 固相萃取及浓缩

按照图1所示的方法进行SPE1000方法编辑,并加载方法到相应通道,进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中,氮吹浓缩至干,用1 mL流动相定容

 

1   氯霉素SPE富集方法

1.3.3 UPLC-MS测定牛肉中氯霉素

液相条件:

色谱柱:C185 μm4.6 mm*100mm 

    速:0.2 mL/min 

进样量:5 μL

流动相:乙腈:水=40:60;

MS条件:

气帘气~40       CAD~9      TEM~150      GS1~40  喷雾电压-4500V

1  氯霉素母离子/子离子(定量例子152.0)

名称

母离子/子离子

CE

DP

CXP

氯霉素

321.0/152.0

-23

-70

-8

321.0/256.7

-16

-70

-8

氯霉素D5

326.1/156.9

-23

-70

-30

2试验结果

2.1牛肉氯霉素色谱图

2.1.1牛肉中氯霉素标品色谱图

2为取200 μL氯霉素标准工作液200μL氯霉素内标工作液,流动相定容到1.0 mL检测,氯霉素标品出峰色谱图,出峰时间为 1.50min

 

 

 

 

 

 

 

 

2  氯霉素标品出峰色谱图

2.1.2牛肉中氯霉素样品色谱图

 

 

 

 

 

 

 

 

3氯霉素加标样品出峰色谱图,出峰时间为1.50min4为空白样品色谱图。

3  氯霉素加标样品出峰色谱图

 

 

4   空白样品色谱图

2.2 UPLC-MS测定牛肉中氯霉素回收率

液质测定牛肉中氯霉素回收率计算结果如下表,萃取富集后的回收率在之间90.2%~99.5%,重现性RSD3.5%

2  牛肉中氯霉素的加标回收率(加标4 ug/kg

名称

回收率(%

平均值

(%)

RSD

%

1

2

3

4

5

6

氯霉素

99.5

96.0

98.5

95.3

90.2

94.3

95.6

3.5

 

3结果与讨论

SPE1000全自动固相萃取系统净化的样品,其回收率在90.2%~99.5%,重现性为3.5%,准确度与平行性良好且自动化效率高,可应用于此类样品的前处理方法中。

参考文献

农业部781号公告-2-2006 动物源食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱—串联质谱法

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